Для диагностики метахрома-тической
лейкодистрофии активность арилсульфатазы А необходимо определять во фракции
тканевого супернатанта (чтобы исключить арилсульфатазу С) в присутствии
пирофосфата и ионов хлора в реакционной смеси при концентрации субстрата ниже
Кт арилсульфатазы В [Baum et ah, 1959; Austin et ah, 1965].
Из четырех форм (А - D) болезни Ниманна
- Пика две - ChD, возможно, вызваны отличающимся недостаточно хорошо изученным
дефектом фермента. Формы А и В связаны с выраженной недостаточностью
сфингомиелиназы (фосфатидилхолин-холино-фосфогидролазы). Форма А встречается у
новорожденных, поражает нервную систему и заканчивается смертельным исходом
через 2-3 года. При форме В наиболее характерна спленомега-лия; нервная система
не страдает, и больные могут достигать взрослого возраста.
Изоферменты не обнаружены, активность
фермента выявляется в лизосомах и митохондриях [Weinreb et ah, 1968]. Описаны
три метода определения активности.
Сфингомиелин, содержащий меченный 14С
холин, инкубируют в течение часа с образцом при 37° С и рН 5,0 в присутствии
холата натрия для эмульгирования жиров. Сфингомиелин осаждают разведенной
трихлоруксусной кислотой, надосадочную жидкость отмывают эфиром и меченый фосфорилхолин,
оставшийся в водной фазе, оценивают с помощью жидкостного сцинтилляционного
счетчика [Brady et ah,1966].
Меченый дигидросфингомиелин (тритиевый)
инкубируют с раствором тритона Х-100 в буфере (рН 4,8) с тканевым препаратом.
После инкубации при 37° С в течение 2 ч меченый дигид-роцерамид экстрагируют в
гептаноизопропиловую смесь и радиоактивность оценивают с помощью жидкостного
сцинтилляционного счетчика [Schreider, Kennedy, 1967].
Нерадиоактивный сфингомиелин в растворе
таурохолата натрия инкубируют при 37° С и рН 5,2 с тканевым препаратом в
течение 2-48 ч.
