Затем либо выделяют церамид с помощью
хроматографии в тонком слое и его содержание оценивают по интенсивности
окраски, либо сфингомиелин осаждают разведенной трихлоруксусной кислотой и в
супернатанте колориметрически определяют содержание фосфора в
фосфорилхолине [Harzer, Benz, еще у
одного больного фермент не инактивировался нуклеотидами [Kelley, Meade, 1971].
Определение активности фермента
осложняется присутствием ксантиноксидазы, гуаназы, синтетазы аденилянтарной
кислоты и б-нуклеотидазы, которые конкурируют за субстраты или продукты в
большинстве тканей. Тиамидин трифосфат иногда добавляется в инкубационную пробу
для того, чтобы инактивировать 5- нуклеотпдазу [Fujimoto, Seegmiller, 1970].
Часто для определения активности используют эритроциты, поскольку они имеют
очень высокую трансферазную активность и одновременно низкую активность
мешающих ферментов [Lavy et al, 1962].
Активность фермента определяется в процессе
инкубации с радиоактивными С-гипоксантином или 14С-гуанином, в присутствии
тимидинтрифосфата, хлорида магния и 5-фосфорибозил-1-пирофосфата в трис-буфере
при рН 7,4 и температуре 25-38° С в течение 10-60 мин. Меченые нуклеотиды
разделяют с помощью высоковольтного электрофореза, тонкослойной колоночной или
аффинной хроматографии и оценивают с помощью жидкостного сцинтилляционного
счетчика [Seegmiller et al, 1967; Chow et al, 1970; Fujimoto, Seegmiller, 1970;
Sperling et al, 1971].
Это заболевание характеризуется тяжелым метаболическим ацидозом, который
может приводить к задержке роста или развития в первые месяцы и первый год
жизни. Вследствие недостаточности метилмалонил-КоА КоА-карбонилмутазы
[Rosenberg et al, 1968а, b] происходит значительное увеличение концентрации
метилмалоновой кислоты в моче и крови. Этот фермент превращает
L-метилмалонил-КоА в сукцинил-КоА.
