Аргининоянтарная кислота обнаруживается
в больших концентрациях в моче, крови и спинномозговой жидкости. Основная
причина увеличения ее концентрации в биологических жидкостях заключается в
недостаточности фермента L-аргининсукцинатарги-нинлиазы: аргининоянтарная
кислота -- фумарат + L-арги-нин.
Этот фермент локализуется в печени,
мозге, почках, эритроцитах и культуре кожных фибробластов. Его активность
определяется в процессе инкубации тканевого гомогената с аргининоян-тарной
кислотой и аргиназой в фосфатном буфере рН 7,3 и при 37 °С в течение 30 мин.
Аргинин, образующийся в процессе реакции, в присутствии аргиназы превращается в
мочевину, содержание которой определяют колориметрически в безбелковом
су-пернатанте по реакции а-нитрозопропиофенолом пли диметилгли-оксимом [Brown,
Cohen, 1960; Kulhanek, Vojtiskova, 1964].
Активность фермента может быть оценена
колориметрически. Следует отметить, что даже в гомогенатах нормальной печени активность
фермента очень низка. Более чувствительный радиохимический метод требует для
определения активности гораздо меньше ткани по сравнению с другим методом.
Гомогенат печени инкубируют с
цитруллином, аспарагино-вой кислоты, АТФ, сернокислой магнезией, фосфатным
буфером рН 7,0 и аргиназой в течение 30 мин при 37°. Реакция останавливается
добавлением перхлорной кислоты. В присутствии аргининсукцинатлиазы, имеющейся в
гомогенатах печени, и аргиназы аргининосукцинат, образующийся в процессе
реакции, превращается в мочевину, содержание которой определяют
колориметрически при 450 нм по реакции с а-изонитрозопропифено-лом [Brown,
Cohen, 1960].
При радиохимическом исследовании в
инкубационную смесь включается 14С-цитруллин. 14С-цитруллин, остающийся после
реакции, выделяется из белкового супернатанта с помощью бумажной хроматографии
и его количество подсчитывают при помощи счетчика [Levin, 1971].