Меченый гомоцистеин отделяют от
непро-реагировавшего серпна с помощью ионообменной, бумажной или тонкослойной
хроматографии и измеряют его радиоактивность либо сканированием, либо после
элюции в газожидкостном счетчике [Mudd et al., 1965; Suda et al., 1971;
Goldstein et al.,. 1972].
Недостаточность оксипролиноксидазы,
катализирующей превращение L-оксипролина в 1-пирролин-3-окси-5-карбоксильную
кислоту, приводит к оксипролинемии. Это заболевание характеризуется умственной
отсталостью, гиперактивностыо и цикличностью поведения [Pelkonen, Kivirikko,
1970].
Ферментативная активность обнаружена в
печени и почках, хотя выделить фермент пока не удалось. Этот фермент был
вначале идентифицирован как пролнноксидаза [Adams, Goldstein, 1960]. Однако
Efron (1965) показал, что в печени больных с про-линемией I типа, при которой
пролнноксидаза практически отсутствует, найдена нормальная оксппролииоксидазная
активность. Более того, в ткани головного мозга здоровых людей обнаруживается
пролнноксидаза, но не оксипролиноксидазная активность [Efron et al., 1965].
Недостаточность фермента в тканях больных оксипролинемией еще не
продемонстрирована непосредственно: по-виднмому, это обусловлено нарушением
экскреции 1-пирролин-З-окси-5-карбоксильной кислоты и других метаболитов после
нагрузки оксипролином [Efron et al., 1965].
Описаны два метода определения
активности оксипролиноксидазы:
1. Образцы инкубируют в течение ночи при
37° С с L-окси-пролином в фосфатном буфере рН 7,5. Продукт, Д-пирролин-З-окси-5-карбоксильная
кислота, определяется после осаждения белков трихлоруксусной кислотой с помощью
реакции с о-аминобен-зальдегидом. На спектрофотометре регистрируют поглощение
конечного продукта реакции, окрашенного в желтый цвет [Johnson Strecker, 1962;
Efron, 1965].
2. 4С-оксипролин инкубируют при 37° С с образцом, буфером НАД+ и
никотинамидом.
