В печени и, возможно, в других тканях
меченый Д-ппрролин-З-окси-б-карбоксильная кислота (ПОКК) образуется под
влиянием оксидазы оксипролина и затем метабо-лпзируется до окснглутаминовой
кислоты ПОКК-дегидрогеназой, почти всегда присутствующей в гомогенате. После
разделения продуктов реакции с помощью высоковольтного электрофореза полосу,
соответствующую окснглутаминовой кислоте, элюируют и ее содержание измеряют с
помощью сцинтилляционного счетчика [Efron, 1965]. Методом выбора является
отделение меченой ПОКК с помощью реакции с о-аминобензальдегидом и ионообменной
хроматографии, концентрация продукта может быть измерена на сцинтилляционном
счетчике [Phang et al., 1975].
Окислительное декарбоксилирование
разветвленных кетокис-лот (образующихся трансаминированием лейцина, изолейцина
г валина) может быть мультиферментной сложной реакцией. Однако возможна более
чем одна система, поскольку ферменты различаются по своей субстратной
специфичности, рН-оптимуму и природе кофактора [Goedde, Keller, 1967]. Комплекс
с активностью по отношению к 6-карбоновым кислотам (а-кетоизокапроату и
а-кето-В-метилвалериату) может быть разделен ультрацентрифугированием от
ферментов, специфичных к 5-карбоновым кислотам [Connelly et al., 1968; Bowden,
Connelly, 1968].
Окислительное декарбоксилирование
включает, возможно, три различных апофермента и кофактора, тиаминпирофосфат,
липае-вую кислоту, коэнзим А и НАД+ [Goedde, Keller, 1967].
Под общим названием болезни, при которой
моча имеет запах кленового сиропа, описываются по крайней мере четыре
состояния, связанные с нарушением окислительного декарбоксилирова-ния трех
кислот. При классической форме заболевания затруднено образование меченого С02
из меченых кислот в культуре лейкоцитов и фибробластов, тогда как меченый
изовалерпат ме-таболизируется нормально [Dancis et al, 1963; Dancis et al,
1969].
