Механизм гидроксилирования сложен и до
конца неясен. В последние годы показано, что для течения реакции необходимы
молекулярный кислород и восстановленный птеридин. Хотя некоторые
тетрагидроптеридины участвуют в реакции, однако природный кофактор
тетрагидробиоптерин имеет самую низкую константу Михаэлиса, т. е. обладает
очень высоким сродством к данному ферменту. Изотопные исследования показали,
что молекулярный кислород, вовлекаемый в реакцию, происходит из атмосферы, а не
из воды. Фермент реагирует специфически с L-изомером аминокислот, у которого
должна быть пнтактной боковая аланиновая часть цепи в положении 4 [Kaufman,
1958, 1963, 1971].
Недостаточность активности фенплаланингидроксилазы
печени впервые описана Jervis (1953). Существование этой патологии подтверждено
современными биохимическими исследованиями [Friedman et al., 1973].
Классическая фенилкетонурия характеризуется значительным увеличением
концентрации фенилаланина в плазме крови и экскреции фенилкетона с мочой в
сочетании с клиническими симптомами, описанными выше. В некоторых случаях
наблюдаются явления частичной недостаточности активности гидроксилазы
фенилаланина [Justice et al., 1967; Kang et al., 1970].
Для определения активности в настоящее
время используют четыре метода:
L-фенилаланнн инкубируют с образцом в
буфере рН 6,8- 7,3 в условиях перемешивания на воздухе при 25° С, в присутствии
тетрагидроптерпдина. Для регенерации тетрагидроитеридина, образующегося в
процессе реакции, в инкубационную смесь вводят НАДФ-Н и
днгидроптеридинредуктазу. Система для регенерации НАДФ-Н обычно включает
глюкозодегидрогеназу, глюкозу й НАДФ+. В качестве редуцирующего агента может
быть использован дптнотреитол; кроме того, для защиты тетрагидроптериднпа от
окисления Н2Ог в инкубационную пробу добавляют каталазу.
