Модификации этого метода использованы для определения эритроцитарного Гал-1-Ф. Schwarz (1960) предложил простой микрометод для распознавания галактоземии, который основан на том, что в норме гемолизаты при добавлении УДФГ и НАДФ могут поглощать кислород в присутствии Гал-1-Ф в качестве субстрата, в то время как гемолизаты больных с галактоземией не поглощают кислорода в этих условиях.
Монометрический метод определения гексозо-1-фосфатуридилил-трансферазы разработан Kirkman и Bynum (1959). К среде, содержащей УДФГ, НАДФ, гемолизат, фосфоглюкомутазу, глюкозо-1,6-дифосфат и метиленовый синий, добавляли Гал-1-Ф и измеряли скорость потребления кислорода при инкубировании смеси в сосуде Варбурга в течение часа. Значение скорости определяли каждые 5 мин для того, чтобы получить уверенность в том, что скорость определяемой реакции соответствует кинетике реакции нулевого порядка. Результаты выражали в миллилитрах кислорода, потребляемого за 1 ч 0,3 мл гемолизата.
Реакции, на которых основан этот метод, являются более сложными. Образующийся в трансферазной реакции глюкозо-1-фосфат превращается под действием мутазы в глюко-зо-6-фосфат в присутствии глюкозо-1,6-дпфосфата в качестве кофактора реакции. Глюкозо-6-фосфат превращается в 6-фосфоглюконовую кислоту в присутствии специфической дегид-рогеназы. Образующийся НАДФ-Н ферментативно окисляется и водород переносится на метиленовый синий, восстановленная форма которого самопроизвольно окисляется атмосферным кислородом. Таким образом, скорость потребления кислорода служит мерой гексозо-1-фосфатуридилилтрансферазной активности.
Оптимум рН ее 7,0-9,0 в зависимости от субстрата и присутствия активаторов. В кислой среде происходит разрушение фермента. Наиболее важной с клинической точки зрения является липаза поджелудочной железы, несмотря на то что в тканях и жидкостях тела встречаются и другие липазы. Некоторые из них являются высокоспецифичными по отношению к субстрату, например фосфолипазы А и С, которые воздействуют на фосфолипиды. Панкреатическая липаза водорастворима и ее липолитиче-ское действие ограничивается поверхностью жировых глобул.
