Материал нельзя оттаивать и повторно
замораживать, для анализа маленькие кусочки ткани надо удалять скальпелем и
очень быстро взвешивать. Хирург, иссекающий кусок ткани для биопсии, не должен пользоваться
порошком для перчаток, поскольку он содержит крахмал, который может
симулировать гликоген при анализе. Ткани, взятые для биопсии, но должны
контактировать с любыми химическими реагентами, даже с солью; ткань печени,
взятая иглой для биопсии, должна быть быстро отделена от крови перед
замораживанием. Если ткань фиксируется для электронной микроскопии, то это
должно быть сделано сразу после биопсии. Световая микроскопия, при которой для
фиксации используют формально-солевые смеси, пежелательна, поскольку
полисахарид довольно хорошо растворим в этих условиях. Это особенно справедливо
для гликогена при заболевании тина III, при котором короткая наружная цепь
делает молекулу гликогена более растворимой. В этом случае требуются методы
фиксации, основанные на спиртовых смесях: это приводит к осаждению гликогена в
ткани, которая может быть окрашена, например, Schiff-реагентом - перйодатной
кислотой, которая успешно используется для обнаружения ферментов деградации
гликогена.
Использование лейкоцитов в диагностике
этих нарушений описано Huijing (1967) и другими авторами (см. Ryman, 1974).
Различные методы, применяемые для получения лейкоцитов, например осаждение само
по себе или использование декстрана для осаждения эритроцитов, дают выход
различных популяций лейкоцитов, и этот факт может затруднять интерпретацию
низких уровней, особенно если лейкоциты применяются для обнаружения
гетерозиготного состояния. Имеются также обзоры и сообщения об использовании
фибробластов [Brown, Brown, 1972; Di Mauro et al, 1973], кожи [Leathwood,
Ryman, 1971] и амниотических клеток [Hug et al, 1970; Nadler, Gerbie, 1970] для
определения ферментативной активности или аномального накопления гликогена при
этих нарушениях.
Несмотря на то, что методология
исследования гликогенны-х болезней хорошо обоснована, тем не менее имеются
значительные трудности в выборе наиболее пригодного метода.
