Дефицит пируваткиназы обнаружен не
только у людей, но и у высокоинбредных собак [Searcy et al., 1971; Prasse et
al., 1975], у которых анемия может закончиться миелофиброзом и ранней смертью.
Подобно Г-6-ФДГ, мутантная
пируваткиназа, вызывающая гемолитическую анемию, весьма изменчива и кодируется
двумя различными мутантными генами, что осложняет ее характеристику. Так,
остаточная ферментативная активность в эритроцитах представлена не только двумя
различными ферментами, но и их гибридами. Будучи аллостерическим ферментом,
пируваткиназа значительно активируется очень низкими (0,1 мкм) концентрациями
фруктозо-1,6-дифосфата (Ф-1,6-ДФ) в присутствии небольшого количества
фосфоенолпирувата. Это довольно необычно, ибо в эритроцитах (т. е. in vivo)
концентрация Ф-1,6-ДФ в 20 раз выше, чем в этих экспериментах in vitro
[Niessner, Beutler, 1973]. Некоторые мутации пируваткиназы, приводящие к HNSHA,
значительно снижают Vmax, другие генетические варианты этого действия не
оказывают, хотя обладают нарушенными аллостерическими свойствами, иногда резко
сниженной устойчивостью к активации Ф-1,6-ДФ.
Дефицит эритроцитарной пируваткиназы
вызывает увеличение уровня фосфоенолпирувата, который в свою очередь, повышая
уровень 2,3-дифосфоглицериновой кислоты [Yamada et aL, 1974], приводит к сдвигу
вправо кривой диссоциации кислорода.
На этом фоне, несмотря на выраженную
анемию, наблюдается улучшение состояния больных [Delivoria-Papadopoulos et al.,
1969].
Диагностика пируваткиназного дефицита в
эритроцитах осложняется тем, что им также богаты лейкоциты, где генетический
контроль фермента носит иной характер. Поэтому лейкоциты необходимо путем
специальной фильтрации удалять [Busch, Pelz, 1966; Beutler, 1975].
Аллостерические свойства фермента обычно исследуют в диализованном гемолизате
как в присутствии, так и в отсутствие Ф-1,6-ДФ [Blume et al., 1973]. Для
диагностики заболевания можно использовать флюоресцентный тест, а также
определение термостабильности фермента, которая, например, очень снижена у
мутантов [Blume et al., 1973; Beutler, 1975].
