Если это условие не соблюдается, то реакция с ферментом-индикатором становится лимитирующей и полученные низкие величины активности трансаминазы не соответствуют действительности.
Эта проблема еще больше усложняется, если используется несколько дополнительных ферментативных реакций, как, например, в случае определения активности креатинкиназы по методу Oliver (1955) -Rosalki (1967). Некоторые исследователи описали эффект разведения, который приводит к значительному завышению активности креатинкиназы в том случае, если сыворотка разводится до определения активности [Craig et al., 1967; Spikeman, Brock, 1969; Holt et al., 1971]. Этот момент отчасти обусловливает определенное несоответствие результатов, получаемых во вспомогательных ферментных системах [Dinovo et al., 1973]. В качестве дополнительных ферментов используют гексокиназу и индикаторный фермент, НАДФ-зависимую глюко-зо-6-фосфатдегндрогеназу. В присутствии возрастающих концентраций этих второстепенных ферментов Dinovo и др. (1973) пашли существенное снижепие эффекта разбавления. Это подтверждает необходимость точно устанавливать верхнюю границу для использования подобных методов определения ферментативной активности. В противоположность спектрофотометривеским методам Dinovo и др. (1973) показали, что автоматический вариант [Segel, Cohen, 1967] метода Hughes (1962) дает прямолинейную зависимость в более широком диапазоне активности сывороточной креатинкиназы. В этой связи интересно заметить, что Rosalki и Tarlow (1972), используя автоматический флюоримет-рический метод, при котором креатин, образующийся в ходе первичной реакции, определяется непосредственно [Rokos et ah, 1972], получили более высокие величины активности (на 30% выше, чем при спектрофотометрическом методе).
Активность некоторых других ферментов может быть определена с помощью трех последовательных катализируемых ферментами реакций, например аденилаткиназы, гексозо-1-фосфатури-дилтрансферазы и альдолазы. При использовании этих методов необходимо гарантировать адекватные концентрации вспомогательных ферментов.
