Калибровка этих методов, однако, чрезвычайно затруднена, поскольку окраска, обусловленная присутствием субстрата, уменьшается, в то время как окраска, вызываемая оксалоацетатом, нарастает. В некоторых случаях этих трудностей избегают, используя в качестве стандарта пируват, с помощью которого эмпирически определяется активность трансаминазы. Иногда интенсивность окраски в опытных пробах сравнивают с той, что дает сыворотка, активность которой предварительно определяется другим методом. Такую стандартизованную сыворотку обычно лиофильно высушивают и ее коммерческие препараты используют для построения калибровочных кривых. Но, поскольку потребитель не в состоянии контролировать условия хранения в процессе транспортировки, рекомендуется перед использованием такой стандартизованной сыворотки проверить ее активность.
В действительности сравнение активности различных продажных препаратов стандартизованной сыворотки для ферментных определений обнаруживает несовместимые величины [Dobrow, Amador, 1970]. Кроме того, стандартные сыворотки могут использоваться для разных целей: в качестве стандарта, для точного контроля между методами и в рамках метода [Fasce et al., 1973].
Имеется также еще одна трудность при использовании продажных лиофильных препаратов в качестве стандарта, связанная с необходимостью выждать определенное время от момента их подготовки к работе до восстановления их максимальной активности. Например, активность щелочной фосфатазы в таких препаратах медленно растет, и рекомендуется перед использованием хранить их в течение ночи при комнатной температуре. Подобные эффекты наблюдались при использовании смеси замороженных сывороток.
Методы непрерывного определения ферментативной активности имеют преимущество перед методами анализа по двум точкам, поскольку реакцию можно контролировать в течение всего периода ее протекания.
