Основаны на методике, разработанной Wohlgemuth, согласно которой ряд разведений сыворотки или мочи инкубируют с крахмалом, избыток которого определяют по голубому окрашиванию, появляющемуся при действии йода [Street, Close, 1956]. Модификация этой методики заключается в том, что йод используется в качестве внешнего индикатора, а время, необходимое для полного гидролиза крахмала, отмечается по секундомеру. Дальнейшее развитие этого метода включает применение йодированной бумаги [Hillman et al., 1967] и измерение поглощения при 660 нм образцов реакционной смеси, обработанных формамидом йода, через определенное время после добавления препарата фермента к субстрату [Lauber, 1969].
Результаты, полученные при помощи йодометрических методов, могут варьировать под влиянием липемических, иктериче-сь-их (желтушных) и гемолизироваппых сывороток крови, а также в присутствии восстановителей. Могут возникнуть также трудности при определении момепта прекращения инкубации.
Сахарогенный метод (определение Сахаров, образующихся при гидролизе крахмала)
Этот классический метод определения амилазной активности основан на выявлении Сахаров, образующихся при гидролизе крахмала. Впервые в клинической химии его применил Somogyi (1938), чья оригинальная методика была впоследствии модифицирована: стали использовать буфер для поддержания постоянного значения рН [Henry, Chiamori, 1960].
Активность обычно выражается в миллиграммах восстанавливающего вещества, рассчитываемого как количество глюкозы, образующейся в течение 30 мин инкубации при 37° С в определенных условиях (единицы Somogyi) па 100 мл сыворотки. Эти единицы легко перевести в количество международных единиц на 1 л сыворотки при помощи коэффициента 1,85.
Этот метод включает измерение вязкости реакционной смеси, состоящей из раствора крахмала и препарата амилазы, например сыворотки. Регистрируют время, необходимое для снижения вязкости на 20%.
