В разработанных флюоресцентных методах в качестве субстрата применяется нефлюоресцирующий фосфат флюоресцирующего спирта или фенола, например 4-метилбеллиферилфосфат [Fem-ley, Walker, 1965] и нафтил-Ав-МХ-фосфат [Johnson, 1969]. Эти методики приблизительно в 100-1000 раз чувствительнее колориметрических методов, поэтому они нашли применение при определении активности минорных компонентов после электрофоре-тического разделения изоферментов щелочной фосфатазы.
Большинство колориметрических методов адаптировано для использования в автоанализаторах и других инструментах [Marsh et al., 1959; Keay, Trew, 1964; Tietz, Green, 1964; Sterling et al., 1964; Ochoa, 1968]. Были также описаны методы, основанные на непрерывном определении скоростей реакции [Bowers, McComb, 1966; Wilkinson et al., 1969].
Если активность щелочной фосфатазы определяется в замороженных или лнофилизированиых препаратах, то необходимо выждать 18-24 ч после оттаивания или приготовления образца, так как активность фермента медленно возрастает в этот период. Это особенно касается концентрированных и замороженных сывороточных образцов и контрольных коммерческих препаратов [Вгоjer, Moss, 1971].
Сывороточная активность щелочной фосфатазы определяется в клинических лабораториях в течение 40 лет, и до сих пор этот параметр является одним из наиболее полезных. Его значение при диагностике костных заболеваний, особенно при заболеваниях, связанных с повышенной активностью остеобластов.
Использование активности щелочной фосфатазы в диагностике заболеваний гепатобилнарного тракта рассматривается в главе 10, однако один аспект необходимо отметить в этой главе. Долгое время исследователи пытались выяснить тканевой источник повышения сывороточной активности щелочной фосфатазы при вне-печеночной закупорке желчных протоков. Недавно эта проблема оыла разрешена. Вскоре после того как впервые были обнаружены такие повышенные активности [Roberts, 1930], Armstrong nonf показали, что экспериментальная закупорка желчно протока у собак вызывает не только гипербилирубниемию, сыво повышение активности щелочной фосфатазы в ротке крови.
