Все три изофермента ингибировались эзерином, а предварительная обработка дейраминидазой не влияла на электрофоретическую подвижность изоферментов (сравни сывороточную холинэстеразу, с. 146). Молекулярные массы изоферментов составляют соответственно 546 000, 184 000 и 93 000, на основании чего Wright и Plummer сделали вывод, что две более крупные молекулы являются полимерами, состоящими из 2 и 6 мономеров. Приведенные ими значения молекулярных масс мономера и димера соответствовали зпачениям, полученным Bellhorn и др. (1970). При длительном градиентном электрофорезе Wright и Plummer (1973) обнаружили три добавочные зоны активности, соответствующие-тримеру, тетрамеру и пентамеру.
Методы, обобщенные ниже, могут в равной степени применяться при определении активности ацетилхолинэстеразы или псевдохо-линэстеразы в тканевых препаратах, сыворотке или плазме крови, однако необходимо отметить, что большая часть ацетилхолинэстеразы связана с мембранами, поэтому при определении ее активности должна быть проведена предварительная обработка детергентами, подобными Тритону Х-100. Из очень большого ряда разработанных методов здесь приводятся только наиболее широко используемые.
Холинэстераза является относительно стабильным ферментом, поэтому препараты или сыворотка могут храниться в течение нескольких недель либо в замороженном состоянии, либо при температуре 0-5° С. Несмотря на то, что холинэстераза - растворимый фермент, большое количество ферментного белка связано с субклеточными структурами, поэтому нежелательно проведение предварительного центрифугирования гомогената перед определением в нем активности фермента с целью осветления препарата.
Общепризнано, что манометрическая методика Amnion (1933) является наиболее надежным и чувствительным методом. Реакция проводится в аппарате Варбурга. Фермент реагирует с субстратом в бикарбонатном буфере (рН 7,4), в атмосфере 95% азота и 5% углекислого газа. Кислота, образующаяся при гидролизе субстрата, реагирует с бикарбонатом, в результате чего освобождается углекислый газ.
