Медицинская диссертация

     Рекомедации по написанию, работа с литературой 
     Возможность заказать поиск защищенных диссертаций

Позднее была разработана более удобная колориметрическая методика, основанная на реакции с 2,4-динитрофенилгидразипом. Сыворотка (или другой препарат) инкубируется с а-кето-глутаратом и аспартатом и образующийся оксалоацетат определяется в виде соединения с 2,4-дипитрафенилгидразином. Так как се-кетоглутарат также взаимодействует с этим реагентом, то существенным недостатком метода является значительное завышение фоновых значений. Оксалоацетат ингибирует фермент [Boyd, 1961], поэтому любая методика, при которой происходит накопление этого продукта, вероятно, приводит к занижению ферментативной активности.
Babson и др. (1962) предложили колориметрический метод, в основе которого лежит цветная реакция оксалоацетата с диазо-ниевой солью. В результате этого проблема фоновых значений была преодолена, однако в процессе определения активности все же происходит накопление оксалоацетата. Калибровка колориметрических трансаминазных методов затруднительна, и обычно результэты представляются в спектрофотометрических единицах с использованием в качестве стандартов контрольных сывороток, активности в которых были определены при помощи спектрофо-тометрического метода. Активность стандарта надо измерять одновременно с определением активности трансамипазы.
По этим причинам обычно предпочитают спектрофотометрические методы определения скоростей реакций, предложенные Каг-men (1955). Они основны на сопряженной ферментативной реакции, в ходе которой удаляется оксалоацетат по мере его образования. НАД+-зависимая малатдегидрогеназа служит в качестве индикаторного фермента, и активность трансамипазы определяется по снижению поглощения при 340 нм вследствие окисления НАД-Н. Сыворотка преинкубируется с фосфатным буфером (рН 7,4). содержащим НАД-Н, аспартат- и малатдегидрогеназу, чтобы полностью восстановить эндогенные а-кетокислоты при помощи НАД Н-зависимых дегидрогеназ и для достижения температуры реакции. Добавляемый затем а-кетоглу-тарат запускает реакцию.