Определение активности малатдегидрогеназы в
сыворотке связано с рядом проблем. Равновесие сдвинуто в сторону реакции
образования малата, которая заметно ингибируется оксалоацетатом. Оксалоацетат,
однако, является в значительной степепп нестабильным соединением, которое
подвергается спонтапному декар-боксилированню с образованием пирувата. Таким
образом, при определении активности фермента при помощи обратной реакции с
оксалоацетатом в качестве субстрата возможно одновременное восстановление
присутствующего в субстрате пирувата лактат-дегидрогеназой сыворотки
(эндогенный пируват, конечно, будет восстанавливаться во время преинкубации
перед добавлением оксалоацетата), что в конечном итоге приводит к завышению
значений малатдегидрогеназной активности, определяемой по накоплению НАД+. По
этой причине King (1961) предложил колориметрический метод определения
активности фермента, при котором в качестве субстрата используется малат, а
количество образующегося в ходе реакции оксалоацетата измеряется по накоплению
продукта взаимодействия его с 2,4-динитрофенилгидразоном.
В большинстве исследований, посвященных
клиническому значению этого фермента, использовалась спектрофотометрическая
процедура, основанная на реакции НАД+ - НАД
Н-подобной той, которая была предложена для определения активности
лактатдегидрогеназы, но при помощи оксалоацетата в качестве субстрата [Siegel
et al., 1956]. Спектрофотометрические измерения активности
малатдегидрогеназы при помощи прямой
реакции с малатом в качестве субстрата уже вошли в арсенал клинических
лабораторий. Проблему оксалоацетатного ингибирования смогли преодолеть
посредством добавления глутамат- и ас-партаттрансаминаз, которые должны удалять
ингибирующий продукт по мере его образовании.
Эритроциты обладают значительной малатдегндрогеназной
активностью, и поэтому гемолизированные образцы дают ошибочно высокие значения
активности фермента.
