Комплексообразующие агенты, подобные ЭДТА,
оказывают сходное действие, связывая ионы тяжелых металлов.
Обычные методы определения активности фермента
основаны на изучении скорости реакции, для чего необходимо измерять либо
скорость расходования субстрата, либо скорость образования продукта реакции. В
любом случае время - фактор чрезвычайной важности. Для наблюдения за ходом
реакции, кроме химических способов определения количества продукта или
субстрата, можно применить один из нескольких чисто физических методов,
например регистрацию оптической плотности при определенной длине волны,
коэффициента преломления, вязкости или изменения степени поляризации.
Скорость ферментативной реакции в значительной
степени зависит от условий, в которых она проводится. Здесь будет рассмотрено
влияние таких факторов, как концентрация фермента и субстрата, рН среды,
температура и присутствие активаторов или ингибиторов.
Скорость реакции повышается пропорционально
увеличению количества фермента, если все остальные факторы при этом не
изменяются. При графическом изображении этой зависимости должна быть получена
прямая линия, отклонения от которой свидетельствует о влиянии некоторого
лимитирующего фактора. При значительном возрастании концентрации фермента
количество субстрата становится недостаточным для проявления максимальной
активности фермента, что приводит к отклонению от прямой линии. Например,
неожиданно высокая активность щелочной фосфатазы может привести к почти полному
потреблению субстрата и, следовательно, к ошибочно заниженным результатам.
Подобный тип кривой может быть получен, если
скорость исследуемой реакции превышает возможности вторичной химической или
ферментативпой реакции, используемой для определения скорости первичной
реакции. При спектрофотометрическом определении активности аспартаттрансаминазы
сыворотки крови оксало-ацетат восстанавливается до малата в присутствии
малатдегидро-геназы и НАД-Н.
