Очень высокие активности трансаминазы могут
привести к тому, что количество образуемого аксалоацетата будут превышать
возможности, обеспечиваемые данными количествами малатдегидрогеназы и
кофермента. Поэтому очень важно следить за тем, чтобы реагенты и ферменты для
вторичных реакций были взяты в избыточном количестве.
Если в препаратах химических соединений,
необходимых для проведения ферментативной реакции, присутствуют в качестве
примесей следовые количества ингибиторов, таких, как соли свинца ртути или
меди, то первые порции фермента будут неактивны. Однако, когда эти соединения
полностью прореагируют с ферментом, последующее добавление фермента приведет к
нормальному линейному ответу.
Отклонения от прямой линии могут также быть
вызваны наличием ингибитора в ферментном препарате. В этом случае при более
высоких концентрациях фермента образуются большее количество неактивных
комплексов фермент - ингибитор. Присутствие в ферментном препарате активатора
оказывает противоположное действие, и кривая зависимости скорости реакции от
концентрации фермента будет располагаться на графике выше нормальной прямой
линии можно определить значение константы диссоциации комплекса фермент -
ингибитор.
Третий тип ингибирования, бесконкурентное
ингибирование, как считается, обусловлен взаимодействием ингибитора с
фермент-субстратным комплексом, хотя возможны и другие объяснения. В этом
случае на графике с координатами Лайнуивера - Бэрка появляется прямая линия,
параллельная нормальной прямой линии, т. е. изменяется как Vmax, так и
кажущаяся Кт. Пример подобного типа ингибирования встретился автору при
изучении самопроизвольного появления ингибиторов в образцах 2-оксимасляной
кислоты при длительном хранении [Wilkinson et al., 1968]. Так как
2-оксимасляная кислота может использоваться для дифференциальных измерений
изоферментов лактатдегидрогеназы, то подобные сведения могут иметь практическую
ценность.
Другие методы графического изображения
взаимоотношений между скоростью реакций и концентрациями субстрата.
