Большинство ферментов почти мгновенно
инактивируется при воздействии температур, близких к 100° С, и в клинической
химии часто применяется кипячение для ингибирования нежелательных
ферментативных процессов. Необходимо отметить, однако, что некоторые другие
факторы, такие, как рН среды, наличие защитных белков и влияние активаторов или
ингибиторов, могут модифицировать скорость термической инактивации.
Влияние температурных изменений на кинетические
характеристики ферментативных реакций само по себе является очень сложным
процессом. Общеизвестно, что повышение температуры на 10° С вызывает
двух-трехкратное возрастание скорости реакции. Изучение подобных эффектов дает
возможность рассчитать энергию активации ферментативных реакций. Эта величина
представляет собой количество энергии, необходимое для активации молекул
реагирующего вещества так, чтобы они стали способны Припять участие в данной
реакции. В неферментативных химических реакциях для преодоления энергетического
барьера необходимо затратить относительно большие количества энергии, тогда как
в соответствующих ферментативных реакциях на эти цели расходуется значительно
меньше энергии. Так, сахароза может инвертироваться либо при помощи фермента
инвертазы, либо без участия фермента, при действии кислот: энергия активации в
первом случае составляет 11000-13 000 кал/моль, что значительно меньше, чем 26
000 кал/моль, необходимые для осуществления чисто химической реакции.
Выбор оптимальных температур при исследованиях
ферментов в клинических целях является более спорным вопросом. Какая бы ни была
выбрана температура, она должна быть не только постоянной при выполнении серии
ферментых анализов, но и в клинической лаборатории она не должпа меняться день
ото дня. Достаточно быстро было выяснено, что комнатная температура или
температура, достигаемая в кюветном отделении спектрофотометра, в некоторых
ранних исследованиях была неадекватной и что необходим точный температурпый
контроль, предпочтительно в пределах ±0,1° С. Для проведения ферментативных
исследований предлагался ряд температур (25°, 30°, 32°, 35°, 37°С), однако в
настоящее время, общепринято, что необходимо стандартизировать этот параметр.
