При приготовлении гемолизатов для определения глюкозо-6-фосфатдегидрогепазы важно отделить строму, так как содержащаяся в пей НАДФ+-гидролаза удаляет связанный НАДФ+, от которого зависит стабильность фермента. Слой лейкоцитов также должен быть удален, так как лейкоциты обладают значительно большой активностью, чем эритроциты [Marks et al., 1959]. Фермеит является весьма нестабильным, и образцы крови надо готовить таким образом, чтобы задержка была минимальной. Если образцы должны быть оставлены на ночь, их необходимо сохранять иптактнымн при 4° С, так как гемолизаты быстро теряют свою активность, особенно при комнатной температуре. При определении активности фермента гемолизаты предварительно инкубируют с раствором НАДФ+ в трис- или глицнл-глициновом буфере при рН 7,6, содержащим ионы Mg++ в качестве активатора, и реакция инициируется добавлением глюкозо-6-фосфата. Активность фермента рассчитывают исходя из увеличения поглощения при 340 нм в минуту.
Подобная процедура использовалась для определения фермента в сыворотке крови [Kerppola et al., 1950].
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы н ее разновидности имеют большое значепие в исследовании генетически детерминированных гематологических заболеваний, однако определение активности этого фермента при диагностике других заболеваний может также оказаться полезным. Эритроцитарная активность фермента возрастает при тиреотоксикозе, при введении тиреоидных гормонов нормальным индивидуумам также наблюдается ее повышение [Pearson, Druyan, 1961]. Повышенные активности фермента в сыворотке крови отмечаются после инфаркта миокарда, причем пиковые уровни наблюдаются в более поздние сроки, чем для аспартаттрансаминазы и лактатдегидрогеназы. Повышенная активность ферментов в сыворотке может также выявляться после инфаркта легкого, вероятно, как результат внутрисосудистого гемолиза, тогда как при гепатобилиарных заболеваниях наблюдается нормальпая активность этого фермента [Kerppola et al., 1959].
