Активность изоцитратдегидрогеназы в сыворотке
обычно определяется при помощи методики, основанной на методе Wolfson и
Williams - Ashman (1957), в ходе которого раствор сыворотки, НАДФ+ и хлорид
марганца в трис-буфере при рН 7,5 преинку-бируются при температуре реакции
перед добавлением изоцитра-та. После короткой лаг-фазы (1-3 мин) наблюдается
возрастание поглощения при 340 нм в минуту, а активность фермента
рассчитывается в Е/л.
Колориметрические методы, основанные на
взаимодействии продукта реакции а-кетоглутарата с 2,4-динитрофенилгидроа-зипом,
разработаны Bell и Baron (1961), Taylor и Friedman (1960). Общее возражение
против методов, основанных па определении кинетики ферментативной реакции по
двум точкам, а именно, что скорость реакции в ходе достаточно длительного
периода инкубации может отклоняться от кинетики нулевого порядка, в данном
случае, видимо, неправомерно, так как было показано, что данная ферментативная
реакция подчиняется кинетике нулевого порядка до тех пор, пока не восстановится
более чем 50% НАДФ+ . Bell и Baron (1960) продемонстрировали хорошую корреляцию
между колориметрическими и спектрофотометрическими методами.
Метод, основанный па флюоресценции НАД-Н, описан
Cruickshank и др. (1958). Lowry и Passonneau (1972) описали очень элегантный и
чувствительный способ, основанный на этом же принципе, включая определение
скорости реакции в период инкубации.
Несмотря на то что повышенные активности
изоцитратдегидрогеназы были обнаружены и в других условиях, в диагностике
заболевания печени этот фермент нашел наиболее полезное применение. Высокие
значения отмечаются при остром гепатите и обычно снижаются до нормальных
пределов па 2-й и 3-й неделе заболевания, но при хроническом гепатите
повышенные значения могут наблюдаться в течение нескольких месяцев [Sterkel et
al., 1958].