ЛДГ-1
адсорбируется на ДЭАЭ-целлюлозе, в то время как ЛДГ-5 остается в растворе.
Различные изоферменты отличаются также по способности использовать ряд
коферментных аналогов [Cahn et al., 1962; Kaplan, 1963]. Ряд авторов применяли
также избирательное осаждение или денатурацию медленно мигрирующих изоферментов
в определенных растворителях, таких, как хлороформ и ацетон [Warbarton et al.,
1963; Latner et al., 1963]. Ни один из этих методов не нашел интенсивного
применения в диагностических целях.
Внедрение удобных методов электрофоретического
разделения изоферментов лактатдегидрогеназы сыворотки крови (см. обзоры Wieme,
1965; Brewer, 1970; Wilkinson, 1970) ограничило использование методов,
основанных на физико-химическом фракционировании. Широко используемый метод
тетразольного окрашивания был первоначально применен для локализации
изоферментов в электрофоретической среде [Market et al., 1959], для чего был
использован диафоразметилен - голубой краситель для сопряжения восстановления
НАД+ с восстановлением тетразолиевой соли . Добавление ничтожных количеств
переносчика электронов N-метилфеназония метосульфата сильно упростило метод,
так как исчезла необходимость в диафоразе и метилеповом синем [Dewey et al.,
1960; Van den Helm, 1961; Latner et al., 1961]. Несмотря на то что метод
тетразольного окрашивания значительно облегчил клиническое изучение изоферментов лактатдегидрогеназы (и других ферментов),
оценка содержания изоферментов на электрофореграммах при помощи денситометрии
рассматривалась не более как полуколичественная. Как уже упоминалось, ЛДГ-1 и
ЛДГ-5 имеют существенно разное сродство к субстрату, и при окрашивании
электрофоретических полосок или гелей непрактично использовать оптимальные
концентрации субстрата для каждого изофермента. Ошибки также могут быть связаны
с тем, что вблизи главных зон активности возможна полная утилизация субстрата,
в то время как в области минорных полос реакция может продолжаться, и все это
приводит к завышенной оценке активности последних.