Так, концентрации субстрата обычно значительно
превышают физиологические, а концентрации фермента много ниже концентраций,
имеющих место in vivo.
Некоторые ферменты, например
глюкозо-6-фосфатдегидрогена-за, нестабильны при 37° С, поэтому определяемая
активность может быть снижена вследствие потерь, возникающих во время
аналитических процедур при этой температуре. King (1972) сообщил, что
глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа стабильна при 37° С в присутствии субстрата,
однако введение глюкозо-6-фосфата в пре-инкубационную смесь означает, что
реакция должна запускаться добавлением раствора фермента (обычно гемолизата)
или кофермента, что недопустимо при проведении биохимических реакций в
экспериментальных условиях. Возможно также, что коферменты, например НАД-Н, и
другие кофакторы, такие, как глутатион, при температуре 37° С менее стабильны,
чем при 25° С.
Возможность применения температуры 25° С была
рассмотрена Bergmeyer (1973), который отмечал, что это значение близко к
температуре окружающей среды и риск, связанный с температурными флюктуациями во
время исследования ферментов, минимален. Кроме того, лабораторная посуда обычно
калибруется при 20° С, и проведение работы при 37° С может дополнительно
вносить значительные ошибки. С внедрением соответствующих охлаждающих
приспособлений проблема поддержания постоянной температуры водяной бани на
уровне 25° С сильно упростилась. Немецкое общество клинической химии официально
рекомендовало температуру 25° С для проведения ферментативных исследований в
клинических целях.
Более важным вопросом по сравнению с
практическим удобством является клипическая ценность. Тест для определения
наличия избытка изоферментов лактатдегидрогеназы при помощи
2-гидроксибутиратдегидрогеназы (НВД) применим при 25° С, тогда как при 37° С оп
теряет свои дифференциальные возможности [Plummer, Wilkinson, 1963; Smith,
1971; McQueen et al., 1973].
