Они образуют коллоидные растворы и вследствие
высокой молекулярной массы могут быть отделены от низкомолекулярных веществ
диализом. Так как ряд ферментов был получен в кристаллическом состоянии,
оказалось возможным точно оценить их молекулярную массу с помощью
седиментационного анализа, диффузионпых и вискозиметрических методов.
Молекулярные массы различных ферментов охватывают широкий диапазон: так, у
рибонуклеазы она составляет 12 700, а у L-глутаматдегидрогеназы - около 1 000 000.
Оценка молекулярной массы ферментов, которые не были кристаллизованы, может
быть проведена сравнением скоростей диффузии или гель-фильтрацией.
Так как
ферменты - это белки, состоящие из аминокислот, связанных между собой пептидной
связью, они являются цвиттерионами, т. е. обладают положительно или
отрицательно заряженными группами в различных частях одной и той же молекулы.
Когда рН среды доведен до значения, при котором общий заряд фермента минимален
(изоэлектрпческая точка), растворимость белка также минимальна, и фермент может
выпасть в осадок вместе с другими белками, имеющими подобную изоэлектрическую
точку. Наличие заряженных групп дает возможность отделять ферменты от других
белковых компонентов с помощью электрофореза. Процесс разделения белков зависит
от выбора подходящей среды разделения, в качестве последней можно использовать
целлюлозоацетат, крахмальный гель, крахмальный блок и т. д. Кроме того, он
зависит от разности потенциалов на полюсах. Далее приведено несколько примеров,
которые демонстрируют возможность этого метода для разделения ферментов,
входящих в состав определенных белковых фракций сыворотки.
Не так давно для разделения ферментов был
предложен метод пзоэлектрофокусировки [Dale, Latner, 1968]. Суть метода состоит
в том, что смесь белков подвергается воздействию электрического поля, а между
электродами создается определенный градиент рН. Благодаря подобной обработке
различные белки разделяются соответственно своим изоэлектрическим точкам.
