Наиболее широко используется метод Cherry и Crandau (1932), при котором в качестве субстрата применяется эмульсия оливкового масла в фосфатном буфере (рН 7,0). Эта методика предусматривает инкубирование при 37 °С в течение 24 ч, однако этот неудобно длительный период был сокращен рядом исследователей. He удивительно, что реакции не соответствует кинетика нулевого порядка при использовании длительных периодов инкубации. Количество олеиновой кислоты, образующейся после 16 ч инкубации при 37°С, незначительно, как бы долго после этого ни продолжалась реакция.
Олештовая кислота, выделяющаяся во время инкубации, может быть определена титрованием до рН 10,5, при использовании тимолфталеина в качестве индикатора [MacDonald, LeFave, 1962] или при помощи рН-метра [Henry et al., 1967; , Tietz, Fiereck, 1972]. Этот процесс был упрощен Hartel и др. (1971), которые ввели индикатор рН в реакционную смесь и оценивали активность липазы по изменению окраски индикатора. Этот метод, однако, является полуколичественным. Shihubi, Bishop (1971) предложили турбидиметрический метод, основапный на изменении поглощения при 334 нм. Они предположили, что мутность эмульсии исчезает по мере разрушения эфирных связей и прокалибровали свой метод в единицах поглощения 1 мкмоль триолеина на 1 л. Подобная калибровка критиковалась Verduin и др. (1973) на основании того, что образующиеся диглицериды также определенным образом влияют на величину светопоглощения. Количество освобождающихся жирных кислот также можно измерить посредством превращения их в соответствующие соединения с медью, которые экстрагируются хлороформом и обрабатываются 1,5-ди-фенилкарбазидом [Muller, 1972] или диэтилдитиокарбаматом [Lippi et al., 1972]. Поглощение окрашенных комплексов измеряют затем спектрофотометрически при 540 или 520 нм соответственно.
