У. М. Мирахмедов измельчал яичко
здорового кролика, разводил в 0,83% растворе хлористого натрия и добавлял 1 часть сыворотки здорового
кролика. Смесь встряхивают в шюттельаппарате 20-25 мин., после чего
центрифугируют 10 мин. Над осадочная жидкость и служит средой выживания
трепонем.
Основной опыт РИТ. Вся посуда,
необходимая для постановки РИТ, должна быть стерильной, ее моют без применения
дезинфицирующих средств, споласкивают дистиллированной водой, высушивают,
монтируют и стерилизуют в автоклаве. Постановку реакции производят в боксе,
предварительно облученном кварцевой лампой течение 30-45 мин.
Инактивированную испытуемую сыворотку
разливают в две пробирки по 0,05 мл. В обе пробирки приливают по 0,35 мл
антигена. В первую пробирку доливают 0,15 мл активного комплемента, во вторую
-0,15 мл инактивированного комплемента. Пробирки встряхивают и помешают в
микроанаэростат, из которого откачивают воздух, а затем заполняют газовой
смесью (95 частей азота и 5 - углекислого газа). Не следует заполнять
микроанаэростат полностью в связи с возможностью расширения газовой смеси при
35°С в термостате.
Кроме двух пробирок основного опыта
ставят 5 контрольных (1-для заведомо положительной сыворотки, 1-для
отрицательной сыворотки, 1-для активного комплемента, 1 - для инактивированного
комплемента и 1 - для контроля антигена).
Подсчет результатов РИТ. После
18-20-часового выдерживания в термостате пробирки вынимают из микро анаэростата,
наносят пастеровской пипеткой по капле на предметное стекло из опытной и
контрольной пробирок, покрывают, покровными стеклами (20X20 мм). В темном поле
микроскопа определяется количество подвижных и неподвижных трепонем в препарате
из контрольной пробирки, затем - из опытной; подсчитывают 25-50 бледных трепонем. Если в контрольной
пробирке обнаружено меньше 17 подвижных трепонем из 25 подсчитанных, опыт
считают неудачным, требующим повторения.
