Титрование сухого комплемента и
установка его рабочей дозы производится обычным способом.
Ряд исследователей указывали, что полный гемолиз является
неточным выражением активности комплемента. Зависимость процента гемолиза от
количества комплемента может быть более точно определена в зоне частичного
гемолиза, соответствующей 50% гемолизу. В связи с этим была предложена 50%
гемолитическая единица активности комплемента, за которую принимают количество
комплемента, способствующее 50% лизису определенного количества (0,5-1 мл)
сенсибилизированных эритроцитов в течение 45-60 мин. при 37°С.
Методика титрования комплемента по 50%
гемолизу: активную исследуемую сыворотку, разведенную 1:10, разливают в 11
пробирок в количестве от 0,05 до 0,5 мл с разницей между отдельными дозами в
0,05 мл: В сыворотку добавляют физиологический раствор до 1,5 мл, после чего в
каждую пробирку прибавляют 1,5 мл гемолитической системы, то есть
сенсибилизированных эритроцитов барана. Учет результатов производится после 45
мни. стояния при 37°С.
В зоне 50% гемолиза легче уловить
различие между смежными степенями гемолиза. Активность комплемента в 50%
гемолитических единицах может быть вычислена графическим методом. Степень
гемолиза при титровании комплемента по 50% гемолизу определяется
преимущественно колориметрическим методом при помощи колориметра,
электрофотоколориметра, спектрофотометра или визуально.
А. П. Конников рекомендовал для определения степени гемолиза
пользоваться шкалой разведений лизированных эритроцитов барана. Активность
комплемента в 50% гемолитических единицах может быть вычислена в пределах
неполного гемолиза - от 10 до 90%.
Расчет 50% гемолитических единиц
комплемента в 1 мл: после титрования активной исследуемой сыворотки,
выдерживания в течение 10 мин. в рефрижераторе (5°С) и центрифугирования,
пробирку из шкалы гемолиза с одной 50% единицей комплемента сравнивают с
пробирками из ряда титрования комплемента.
