В основу этой реакции легли два феномена
- бактериолиза и гемолиза.
Феномен бактериолиза разработали,
иммунизируя морских свинок ослабленной культурой холерных вибрионов. В
сыворотке животных накапливались специфические антитела - бактериолизины. Добавленные
к полученной иммунной сыворотке живые
холерные вибрионы в присутствии комплемента лизировались. Феномен гемолиза
состоит в том, что в сыворотке кролика после повторного введения эритроцитов
барана образуются специфические антитела - гемолизины, способные лизировать
бараньи эритроциты лишь в присутствии комплемента.
Как при бактериолизе, так и при гемолизе
участвуют два компонента: первый - специфическое антитело, нарастающее при
иммунизации (бактериолизины, гемолизины), отличающиеся термо стабильностью;
второй - неспецифический (комплемент), отличающийся лабильностью в отношении
ряда факторов. В качестве антигена обычно применяли бактериальную взвесь или
лизаты из возбудителей того или иного заболевания.
Этапы реакции связывания комплемента:
фаза - смешивание исследуемой сыворотки с антигеном (2-5 мин), добавление
комплемента и выдерживание в термостате (37°) в течение часа (оптимальным
условием для связывания является температура 3-8° в течение 18-20 час); фаза - добавление гемолитической системы (эритроциты
барана, смешанные с инактивированной гемолитической сывороткой) и выдерживание
при 37° до момента регистрации результатов.
Для соединения антигена с антителом
присутствие комплемента не обязательно. Однако образовавшийся комплекс
антиген-антитело жадно адсорбирует добавленный комплемент, под действием
которого происходит растворение
клеток (бактериальных или
животных), связанных со специфическим антителом (иммунный бактериолиз
или гемолиз). Эти свойства антител и лежат в основе методов их обнаружения.
Степень адсорбции комплемента комплексом антиген-антитело зависит от ряда
условий. Большое значение имеет количество антител в исследуемой сыворотке, то
есть величина комплекса антиген-антитело; больший комплекс адсорбирует большее количество комплемента.
