Все указанные ингредиенты разводят в
физиологическом растворе (0,85% раствор хлористого натрия в дистиллированной
воде или в буферном растворе).
Испытуемая сыворотка. Взятие крови
производится натощак или не ранее 6 часов после приема пищи. Нельзя брать кровь
после приема больших количеств алкоголя, у лихорадящих больных, у беременных
последние 10 дней беременности, у рожениц в первые 10 дней после родов, у
новорожденных в первые 10 дней жизни. У взрослых кровь обычно берут из локтевой
вены, у грудных детей - из черепных вен или из надреза пятки при соблюдении
правил асептики. Шприц перед взятием крови промывают физиологическим раствором.
Кровь, взятую в стерильную пробирку (5-6 мл), оставляют на 30-60 мин. в
термостате или на 2 часа при комнатной температуре.
Образовавшийся кровяной сгусток
осторожно отделяют от стенок пробирки прокаленной и остуженной проволокой,
стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой. Кровь помещают на ночь в
прохладное место (рефрижератор, комнатный ледник), но не на мороз. Над сгустком
образуется желтоватого цвета прозрачная сыворотка без примеси эритроцитов,
которая переливается через край или при помощи пипетки с баллоном переносится в
другую сухую пробирку. При попадании в сыворотку примеси эритроцитов ее
центрифугируют и сливают.
Сыворотку подогревают (инактивируют) па
водяной бане при 56°С в течение 30 мин. для уничтожения естественного
комплемента и стабилизации глобулиновых фракций. Допускается инактивация
сывороток при 60СС в течение 5 мин. Сыворотка может оставаться на сгустке не
более 48 час. после взятия крови (кровь, доставленная в лабораторию после
длительного хранения, исследованию не подлежит). Если момент взятия крови
совпадает с процессом всасывания пищи, сыворотка получается мутной. Если при
взятии крови пользуются шприцем, промытым водой, а не физиологическим
раствором, сыворотка получается гемолизированная. Как хилезная, так и
гемолизированкая сыворотка исследованию не подлежат. С осторожностью следует
также относиться к результатам, полученным с сыворотками больных желтухой.
Сыворотка, инактивировапная накануне, должна быть в день постановки опыта вновь
прогрета в течение 15 мин.
