В конце каждого эксперимента для
предотвращения ложноположительных результатов (вследствие анти комплементарного
эффекта) все сыворотки с положительными результатами необходимо протитровать на
остаточный комплемент. Это позволит узнать, не сохранилась ли подвижность
трепонем вследствие недостаточного количества комплемента, когда иммобилизины
не могли проявить свою активность.
Определение остаточного (свободного)
комплемента проводили по методу Н. М. Овчинникова (1961). После подсчета
реакции во все опытные и контрольные пробирки добавляли по 0,1 мл обычной
гемолитической системы (2% взвесь эритроцитов барана и такое же количество
гемолитической сыворотки в тройном титре). Некоторые авторы добавляют по 0,2
мл.
В качестве сравнительной шкалы для
опытных пробирок с активным комплементом служили контрольные пробирки (для
сравнения степени гемолиза) с инактнвным комплементом. Пробирки со штативом
встряхивали и помещали в термостат на 45 мин. при 35°С. При этом эритроциты,
как правило, полностью лизировались во всех пробирках. Лишь в некоторых
(положительных на РИТ пробирках) наблюдалась в той или иной степени задержка
гемолиза. Очень редко комплемент оказывался неактивным. При отрицательной
реакции гемолиза эритроцитов не было ни в одной пробирке. При повторных
исследованиях с двойным количеством комплемента некоторые сыворотки дали
положительные результаты РИТ. При сравнении опытных и контрольных пробирок
видно, где есть комплемент и где его нет. Титрование указанным методом намного
упрощает и ускоряет определение остаточного комплемента и результатов реакции.
Остаточный комплемент, обнаруживаемый
гемолизом, легко выявляется, если комплемент в избытке. Рекомендуется проводить
реакцию с антикомплементарными сыворотками и двойным количеством комплемента.
Если при этом не наблюдается лизиса, исследование повторяют с новой порцией
сыворотки. Антикомплементарность устанавливается, если исследование остаточного
комплемента показывает гемолиз менее 25%.
