Добавление к 100
мл дефибринированной крови 15 мл консерванта сохраняет кровь в течение
3-4 недель; 4) В. К. Голшмид консервирует баранью кровь антибиотиками:
добавление к 20-30 мл дефибринированной крови 50 000 пенициллина или стрептомицина сохраняет кровь
до 4 недель; консервант : глюкозы -2,05
г, цитрата натрия - 0,8 г, хлористого натрия - 0,42 г, дистиллированной воды
-до 100 мл. Лимонной кислотой рН раствора доводят до 6,1. Смесь кипятят на
водяной бане 3 дня по 20 мин., после чего хранят в рефрижераторе. Срок годности 10 дней. Для опыта используют кровь, хранившуюся
не менее 4 дней; эритроциты можно
консервировать замораживанием. К эритроцитам постепенно добавляют 6,2 М
глицерина. Эритроциты медленно замораживают, сохраняют при -85° и оттаивают при
37°. Глицерин удаляют путем разведения его гипертоническим раствором хлористого
натрия, а затем отмывают при центрифугировании непрерывным потоком
физиологического раствора, содержащего 250 мг глюкозы. Общий объем разбавляющего и
отмывающего растворов составляет 3,3 литра. Потери составляют от 5 до 10%
клеток. Отработка эритроцитов с момента извлечения их из холодильника до и
после отмывания продолжается в среднем 30 мин.
Густота взвеси бараньих эритроцитов
имеет существенное значение для результатов реакции связывания комплемента, так
как она оказывает значительное влияние на титр комплемента. Было предложено
несколько методов стандартизации бараньих эритроцитов. Однако наиболее точным
является фотометрирование взвеси эритроцитов.
Для стандартизации взвеси отмытых бараньих
эритроцитов в фотоэлектроколориметре готовят 3% взвесь из отмытых бараньих
эритроцитов. За 15- 20 мин. до начала исследования включают стабилизатор. В
пробирку к 1 мл этой взвеси добавляют 9 мл дистиллированной воды и полученную
лизированную кровь вливают в кювету (10 мм), в другие две кюветы такого же
объема наливают растворитель (смесь из 1 мл физиологического раствора и 9 мл
дистиллированной воды).
В левый кюветодержатель ставят кювету с растворителем, в правый - кювету
с лизированной кровью.
