Разные авторы рекомендуют введение
различного количества трепонем. Г. Б. Беленький получил хорошие результаты при наличии 1-2
трепонем в поле зрения; и соавторы применяли антиген, содержащий 15-40 трепонем в
поле зрения. У. М. Мирахмедов заражал
кроликов, вводя 0,75-1,0 мл суспензии, содержащей не менее 31 активно подвижной
трепонемы.
Техника приготовления антигена. Через
7-9 дней после заражения кролика привязывают к станку, выстригают шерсть с кожи
мошонки, удаляют пушковые волосы и обрабатывают этот участок эфиром. Кролика
обескровливают пункцией сердца, затем умерщвляют воздушной эмболией, вводя
10-20 мл воздуха в краевую ушную вену; в сердце после обескровливания, не
вынимая иглы, также вводят воздух.
Поглаживая живот кролика сверху вниз,
выводят через паховый канал яички в мешонку. Фиксируя рукой яичко, делают
скальпелем поперечный разрез кожи мошонки, через который выводят яичко из
мошонки, отрезают его ножницами и помещают в стерильную чашку Петри; так же выводят
и второе яичко.
Соблюдая стерильность, удаляют придатки
и оболочки яичка, разрезают его на мелкие кусочки и помещают в колбу (емкостью
50-100 мл), в которую предварительно налита среда выживания из расчета 5 мл на
каждое яичко. Колбу ставят в аппарат для встряхивания. Под микроскопом
определяют количество трепонем; при наличии 10-15 бледных трепонем в поле
зрения взвесь встряхивают 20-30 мин., 20-50- 10-15 мин., 60- 100 - 5 мин. После
встряхивания взвесь трепонем центрифугируют 5 мин. при 1000 об/мин для
осаждения кусочков тканей яичка; над осадочную жидкость сливают в стерильную
пробирку. Под микроскопом определяют количество трепонем в поле зрения; антиген
для постановки РИТ должен содержать по 10-15 трепонем в поле зрения. Остающаяся
после постановки РИТ взвесь трепонем используется для заражения кроликов в
следующем опыте.
Техника заражения кроликов. Используют
взвесь вирулентных живых трепонем, оставшуюся после постановки. Заражают не
менее двух здоровых кроликов, путем введения внутрь яичек трепонем в количестве
не менее 50-60 в каждом поле зрения в объеме 0,5-1,0 мл в каждое яичко.
