Сухой порошок (25,0 мг) из мышц бычьего
сердца промывают для удаления нейтральных жиров и других примесей в 100 мл
серного эфира в течение 10 мин.; эфир отфильтровывается, а порошок вновь
подвергается очистке серным эфиром три раза по 10 мин., каждый раз с 75 мл
эфира. Очищенный эфиром сухой порошок экстрагируют пятикратным объемом спирта
(96°) в течение 5 дней; смесь встряхивают ежедневно в течение 10 мин. Спиртовой
экстракт отфильтровывают и холестеринизируют (0,6%), то есть добавляют 0,6 г
кристаллического холестерина к 100 мл экстракта. Полученный антиген следует
хранить при 18-20°С; при более низкой температуре выпадают кристаллы
холестерина. Если это произошло, антиген перед употреблением следует прогреть,
не удаляя пробки, на водяной бане (55-56°С) до полного растворения кристаллов.
Приготовление антигенной эмульсии: в
небольшую широкую пробирку наливают 1 мл антигена, в другую - 1 мл физиологического
раствора; последний обычно вливают в антиген и смесь переливают из пробирки в
пробирку 6-8 раз, после чего смесь оставляют при комнатной температуре 10 мин.;
этой эмульсии хватает на 80 сывороток.
Постановка реакции Кана. По оригинальной
прописи реакцию Кана ставят следующим образом. В три агглютинационные пробирки
вносят при помощи микропипетки 0,05-0,025-0,0125 мл антигенной эмульсии и по
0,15 мл инактивированной сыворотки; смесь встряхивают три минуты и добавляют
0,5 мл физиологического раствора, затем после легкого встряхивания проводится
первая регистрация результатов; вторая - на следующее утро. В настоящее время
постановка реакций Кана производится в большинстве лабораторий лишь с одной
дозой антигена - 0,025 мл. Учет результатов производится невооруженным глазом
или при помощи лупы.
Образование преципитата - хлопьев отмечается как положительный результат
реакции, более слабого преципитата - как слабоположительный и отсутствие
преципитата - как отрицательный результат реакции. В контрольной пробирке (одна
для всего опыта) выпадения преципитата нет. Реакция Кана входит в комплекс
серологических реакций на сифилис и применяется в каждодневной практике
серологических лабораторий уже более тридцати лет; она испытана многочисленными
исследователями на огромном количестве сывороток.
