Ряд исследователей подтвердили ценность метода длительного
связывания комплемента на холоде.
В день постановки опыта комплемент
титруют и применяют с прибавкой к его рабочей дозе 50% комплемента,
вытитрованного в присутствии антигенов. Гемолитическую систему оставляют па
ночь в рефрижераторе. Первая фаза реакции связывания комплемента проводится при
трех различных температурах: 15 мин. при комнатной температуре, 18-20 час. в
рефрижераторе на следующий день 15 мин.
в термостате при 37°С. После этого во все пробирки приливают гемолитическую
систему, ставят в термостат до наступления гемолиза во всех контрольных
пробирках.
Этот метод повышает чувствительность
реакция, так как длительное связывание в течение 18-20 час. дает возможность
обнаружить минимальное количество антител в исследуемой сыворотке. Прибавка к
рабочей дозе 50% комплемента позволяет избежать ложноположительных результатов,
а также задержек гемолиза в контроле. Методом связывания на холоде
рекомендуется исследовать сыворотки лишь с отрицательным результатом реакции
Вассермана. Например, сыворотки больных первичным серонегативным сифилисом дают
нередко при связывании на холоде положительный результат. Реакция связывания
комплемента на холоде широко применяется при выявлении специфического антигена
в сыворотках, тканях или отделяемом слизистой при многих инфекционных и
вирусных заболеваниях.
Подготовительную работу - сливание
испытуемых сывороток со сгустка и их инактивацию, отмывание бараньей крови от
плазмы, определение рабочей дозы комплемента титрованием без антигенов и в
присутствии антигенов, а также всех ингредиентов, участвующих в опыте - следует
производить в день постановки опыта.
Прежде реакция Вассермана ставилась в объеме 5 мл (каждый из
ингредиентов брался в объеме 1 мл); позднее опыт ставился в половинных дозах -
общий объем реакции равнялся 2,5 мл. В настоящее время реакция Вассермана во
многих лабораториях выполняется в объеме 1,25 мл (каждого ингредиента по 0,25
мл); в отдельных лабораториях из-за дефицита некоторых ингредиентов опыт ставят
в объеме 1 мл и 0,5 мл.
