Реакция бласттрансформации лимфоцитов
(РБТЛ) получила широкое применение при ряде заболеваний: лимфолейкозе,
лимфогрануломатозе, лекарственной аллергии, экземе, красной волчанке и др.
Методика постановки реакции
бласттрансформации лимфоцитов. У больного из вены берут 10 мл крови в
стерильную пробирку, в которую предварительно налиты 1 мл физиологического
раствора и 0,08 мл гепарина; добавляют в пробирку 1 мл 10% желатина, после
перемешивания пробирку оставляют на 40-45 мин. при 37°С. Пастеровской пипеткой
оттягивают верхний слон (плазма без примеси эритроцитов), центрифугируют и
вливают в чистую центрифужную пробирку.
Культивирование лимфоцитов проводится в
жидкой среде, к которой добавляют пенициллин и стрептомицин из расчета 1 мл для
сохранения условия стерильности при постановке реакции.
В пробирку с 12 мл среды и антибиотиками вливают 3 мл плазмы,
перемешивают; 2 мл смеси наливают в центрифужную пробирку с осадком лейкоцитов;
тщательно перемешивают и 1 мл взвеси вливают в чистую пенициллиновую бутылочку
и несколько капель помещают на часовое стекло. Меланжером для счета белой крови
до метки 0,5 набирают с часового стекла, добавляют 3% уксусной кислоты,
встряхивают меланжер и подсчитывают количество лейкоцитов в камере Горяева.
Подсчитанное количество умножают на 50. Делают такое разведение в среде с антибиотиками, чтобы в 1 мл был 1 млн.
лейкоцитов. Полученную взвесь разливают по 2 мл в 5 пенициллиновых бутылочек. В
одну добавляют 0,05 мл фитогемагглютинина, во вторую - 0,05 мл сониката
трепонемы Никольса; в третью - 0,05 мл сониката трепонемы Рейтера, в четвертую
- 0,05 мл эмульсии кардиолипинового антигена, пятая бутылочка служит контролем
(без антигена).
Бутылки со смесями закрывают тугими резиновыми
пробками и ставят в термостат при 37°С на 72-96 час. После этого смеси
встряхивают, переливают в центрифужные пробирки; после 10-минутного
центрифугирования верхний слой сливают, а из осадка делают на предметных
стеклах (обезжиренных) тонкие мазки, которые фиксируют метанолом и красят азурэозином.
