Можно применять жидкий, замороженный или
сухой комплемент. Для титрования комплемент разводят 1:30. Перед каждой
постановкой реакции определяется минимальное количество комплемента, дающее
полный гемолиз, то есть точная единица комплемента; полная единица должна быть
на 0.05 мл больше, чем точная. Для постановки опыта применяются 2 полные
единицы в 1 мл.
Для основного опыта разведенный
комплемент следует разделить на 2 полные
единицы. Для основного опыта к 1 мл комплемента следует
Гемолитическая сыворотка консервируется
равным объемом нейтрального глицерина и хранится в рефрижераторе. Из
глицеринизированного гемолизина готовят разведение 1:100 (2 мл
глицеринизировапиого гемолизина, 94 мл физиологического раствора, 4 мл 5%
фенола), причем раствор фенола следует хорошо смешать с физиологическим
раствором, а потом добавить глицеринизированным гемолизин; смесь хранить в
рефрижераторе. Из разведения гемолизина 1:100 готовят ряд разведений.
При разведениях гемолизина в пробирку наливаются 0,5 мл разведенного
гемолизина, 0,3 мл комплемента, 1.7 мл физиологического раствора, 0,5 мл 2%
взвеси бараньих эритроцитов. Затем пробирки помещаются на час в термостат при
37°С.
Единица гемолизина - это наивысшее
разведение, полный гемолиз; использование разведения ниже чем 1:4000 не
рекомендуется. Для постановки применяется 2 единицы гемолизина. Например, если единица гемолизина 0,5 мл разведения 1:6000.
то 2 единицы 0,5 мл разведения
гемолизина 1:3000.
Колмер разработал три реакции: упрощенную,
количественную и реакцию в объема.
Как видно из схемы, опыт ставят в
основной и контрольной пробирках. Контроли в третьей, четвертой и пятой
пробирках ставят один раз для всего опыта; в них проверяется качество ингредиентов,
применяемых в данном опыте.
При положительном результате реакции в основной пробирке наблюдается
задержка гемолиза; во 2-й пробирке (контроль сыворотки) должен быть полный
гемолиз. Реакция может быть положительной, слабо положительный и отрицательной.
