Указанная рабочая доза является
достаточной, если по истечении 10 мин. наблюдается полная задержка гемолиза, а
через 20 мин.- почти полный гемолиз.
Гемолитическая сыворотка - это
инактивированная сыворотка кролика, иммунизированного бараньими эритроцитами. В
результате 3-4-кратной иммунизации кролика 50% взвесью бараньих эритроцитов с
интервалами в 1-2 дня в сыворотке кролика вырабатываются специфические антитела
против бараньих эритроцитов (лизины). Через неделю по окончании иммунизации
добывают 70-80 мл крови у кролика из ушных вен. Полученная сыворотка
инактивируется при 56°С и консервируется карболовым глицерином (9 мл гемолизина
и 1 мл смеси: карболовой кислоты 5,0-глицерина 20,0-(-дистиллированной воды
75,0) и разливается по ампулам.
Определение титра иммунной сыворотки
кролика производится по следующей схеме: готовят основное разведение 1:100 (0,1
мл гемолитической сыворотки 9,9 мл физиологического раствора), из которого
составляют необходимые разведения. Затем в ряд пробирок отмеривают по 0,5 мл
приготовленных разведений гемолизина, добавляют по 1 мл физиологического
раствора, 0,5 мл комплемента (сыворотка морской свинки в разведении 1:10) и 0,5
мл взвеси эритроцитов.
Пробирки помещают на 1 час в термостат и
периодически встряхивают. Титром гемолизина является его наибольшее разведение,
давшее полный гемолиз 0,5 мл взвеси бараньей крови в присутствии комплемента. В
данном примере титр гемолизина равен 1:1800. Для основного опыта титрования
ингредиентов гемолитиченостью лизировать бараньи эритроциты, однако эта
способность зависит от количественного соотношения комплемента и гемолизина в
сыворотке человека.
И. П. Масеткин (1953) различает три вида
гемолизинов: иммунные, вырабатывающиеся при искусственной иммунизации,
естественные, возникающие при естественной иммунизации и гемолизины нормальные,
возникновение которых с иммунизацией не связано.
Кровь барана получают путем пункции его
яремной вены. Баран должен быть в возрасте 1-5 лет; брать кровь у него
допускается не чаще одного раза в 10 дней не более 200 мл.
